Plasmide CRISPR/Cas9 KO COL2A1 (h): sc-400359

Présentation

COL2A1 code la chaîne α1 du collagène de type II, un collagène fibrillaire majeur qui constitue l’ossature structurelle du cartilage hyalin et contribue aux propriétés biomécaniques de la matrice extracellulaire. En s’assemblant en fibrilles de collagène II et via ses interactions avec les protéoglycanes, COL2A1 soutient la différenciation des chondrocytes, l’organisation de la matrice et l’homéostasie du cartilage au cours du développement squelettique. L’expression de COL2A1 est régulée par des programmes transcriptionnels chondrogéniques, notamment des voies dépendantes de SOX9, et s’intègre à des réseaux impliqués dans la maturation, la sécrétion et le remodelage de la matrice extracellulaire. Une altération génétique ou une dérégulation de COL2A1 est associée à un spectre de maladies héréditaires du cartilage et du squelette, ce qui en fait une cible clé pour l’étude de la biologie de la matrice extracellulaire et de la pathologie des chondrocytes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO COL2A1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène COL2A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du COL2A1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert COL2A1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine COL2A1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en COL2A1 pour l'étude de la signalisation de COL2A1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de COL2A1 essentiels à la fonction de COL2A1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de COL2A1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le COL2A1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le COL2A1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus COL2A1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le COL2A1 plasmide HDR (h) et le COL2A1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie COL2A1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles COL2A1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.