Plásmido CRISPR de Activación (h) COL1A1: sc-400064-ACT

COL1A1 codifica la cadena pro-α1 del colágeno tipo I, un componente fibrilar principal de la matriz extracelular que se ensambla en heterotrímeros y aporta resistencia a la tracción a los tejidos conectivos. Su biosíntesis implica el procesamiento en el retículo endoplásmico, la hidroxilación de prolina/lisina, la formación de la triple hélice, la secreción y el entrecruzamiento extracelular, integrándose con la organización de la MEC, la señalización de adhesión focal y los programas fibrogénicos impulsados por TGF-β. La expresión de COL1A1 está estrictamente regulada durante la reparación de heridas y la remodelación estromal, y se utiliza con frecuencia como indicador de la activación de fibroblastos y la deposición de matriz. La desregulación de COL1A1 contribuye a la fibrosis patológica y a la desmoplasia asociada a tumores, y los defectos germinales en el colágeno tipo I se asocian con trastornos hereditarios del tejido conectivo.

COL1A1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de COL1A1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

COL1A1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus COL1A1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional COL1A1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de COL1A1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo COL1A1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de COL1A1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía COL1A1 en células tumorales con expresión de COL1A1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.