Plasmide CRISPR/Cas9 KO COG7 (h): sc-409352

Présentation

COG7 code une sous-unité centrale du complexe d’arrimage COG (conserved oligomeric Golgi), essentiel au trafic vésiculaire rétrograde intra-Golgi nécessaire au maintien de l’architecture de l’appareil de Golgi et à la localisation des enzymes. En coordonnant la capture et la fusion des vésicules avec les membranes golgiennes, COG7 contribue à assurer le bon traitement et le tri des protéines sécrétées et membranaires, y compris les étapes de maturation dépendantes de la glycosylation. Une altération de la fonction de COG7 perturbe l’homéostasie du Golgi et peut entraîner de vastes défauts de glycosylation et de trafic protéiques, des processus essentiels à la régulation des récepteurs de surface, à la sécrétion et à la communication entre organites. Des variants de COG7 ont été associés à des troubles congénitaux de la glycosylation, soulignant l’intérêt de ce gène pour l’étude de la biosynthèse des glycoprotéines et des mécanismes pathologiques liés au Golgi.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO COG7 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène COG7 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du COG7, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert COG7 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine COG7.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en COG7 pour l'étude de la signalisation de COG7, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de COG7 essentiels à la fonction de COG7
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de COG7 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le COG7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le COG7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus COG7. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le COG7 plasmide HDR (h) et le COG7 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie COG7 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles COG7 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.