Plasmide Double Nickase (h) Cofilin 1: sc-400394-NIC

CFL1 code la cofiline 1 humaine, une protéine centrale de liaison à l'actine qui accélère la section et la dépolymérisation des filaments d'actine afin de maintenir un renouvellement rapide de l'actine. En couplant le remodelage du cytosquelette à des signaux en amont issus des GTPases de la famille Rho et de kinases telles que LIMK et TESK, la cofiline 1 contribue à coordonner la dynamique des lamellipodes, l'endocytose, la cytocinèse et la polarité cellulaire. L'activité de CFL1 est strictement régulée par l'état de phosphorylation et par des interactions avec les phosphoinositides, reliant la réorganisation de l'actine à la signalisation et au trafic membranaire. Une dynamique de l'actine dérégulée impliquant CFL1 a été associée dans la littérature à des phénotypes modifiés de migration et d'invasion cellulaires, ainsi qu'à des processus neuronaux et de réponse au stress, pertinents pour plusieurs domaines de recherche sur les maladies.

Cofilin 1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CFL1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CFL1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CFL1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CFL1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.