Plásmido CRISPR de Activación (h) CNP-53: sc-403527-ACT

NPPC codifica el péptido natriurético tipo C (CNP-53), una hormona peptídica secretada que señaliza principalmente a través del receptor del péptido natriurético 2 (NPR2/GC-B) para elevar el cGMP intracelular y activar vías dependientes de PKG. En tejidos humanos, CNP-53 regula la osificación endocondral, la proliferación y diferenciación de condrocitos y la homeostasis vascular, integrándose con la señalización por cGMP para modular la remodelación de la matriz extracelular y programas de crecimiento celular. La señalización NPPC–NPR2 se cruza con procesos regulados por MAPK y por calcio que determinan el desarrollo del cartílago y el crecimiento esquelético. La alteración genética de NPPC o de su eje receptor se asocia con un crecimiento longitudinal óseo anómalo y displasias esqueléticas, lo que hace que esta vía sea relevante para modelar la biología de la placa de crecimiento y fenotipos del tejido conectivo.

CNP-53 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NPPC sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CNP-53 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NPPC en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NPPC, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CNP-53. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NPPC y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CNP-53 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CNP-53 en células tumorales con expresión de NPPC silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.