Plasmide CRISPR/Cas9 KO Clusterin (m): sc-419695

Présentation

Le gène murin *Clu* code la clusterine, une glycoprotéine sécrétée et associée à la matrice extracellulaire, qui agit comme chaperon moléculaire et facteur de liaison aux lipides, impliquée dans la protéostasie, la régulation du complément et l’élimination des débris cellulaires. La clusterine participe à des processus induits par le stress, notamment la modulation de l’apoptose, l’adaptation au stress oxydatif et le remodelage membranaire, et elle a été reliée à des voies contrôlant l’inflammation et l’homéostasie extracellulaire. Dans le système nerveux et d’autres tissus, CLU est souvent étudiée pour ses rôles dans la dynamique de l’agrégation protéique et la signalisation gliale ou immunitaire. Une expression ou une fonction dérégulée de CLU a été associée à la neurodégénérescence, au stress métabolique et à la biologie tumorale, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques des lésions tissulaires et des états inflammatoires chroniques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Clusterin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Clu dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Clu, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Clu à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Clusterin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Clu pour l'étude de la signalisation de Clusterin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Clu essentiels à la fonction de Clusterin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Clu pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Clusterin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Clusterin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Clu. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Clusterin plasmide HDR (m) et le Clusterin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Clu pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Clu définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.