Plasmide CRISPR d'Activation (h) Clusterin: sc-417830-ACT

Le gène humain **CLU** code la **clusterine**, une glycoprotéine sécrétée et intracellulaire qui agit comme chaperon extracellulaire en régulant la protéostasie, le transport des lipides et l’inhibition du complément. La clusterine influence les programmes de survie cellulaire en modulant les réponses au stress oxydatif, l’apoptose et l’élimination des protéines mal repliées ou agrégées, en interaction avec la signalisation inflammatoire et le remodelage de la matrice extracellulaire. Elle est impliquée dans la neurodégénérescence et la biologie cardiovasculaire via ses effets sur la gestion de l’amyloïde, l’intégrité synaptique et l’inflammation vasculaire, et elle est fréquemment étudiée en biologie tumorale pour son rôle dans l’adaptation au stress et les mécanismes de résistance aux thérapies. Ces fonctions font de **CLU** un nœud utile pour disséquer les voies reliant le stress protéotoxique, la régulation immunitaire et les réponses tissulaires aux lésions.

Clusterin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CLU sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Clusterin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CLU dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CLU, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Clusterin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CLU natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Clusterin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Clusterin dans les cellules tumorales présentant une expression de CLU silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.