Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Plasmide Double Nickase (h) CLN1: sc-404018-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CLN1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CLN1 Double Nickase (h) et le plasmide CLN1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PPT1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CLN1 Antibody (1117CT11.2.1.4): sc-517323
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CLN1 | sc-404018-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CLN1 | sc-404018-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PPT1 code la palmitoyl‑protéine thioestérase 1 (CLN1), une hydrolase lysosomale qui élimine les groupements acyles d’acides gras à longue chaîne des protéines S‑palmitoylées, permettant leur dégradation, leur renouvellement et leur recyclage. En régulant la dépalmitoylation, CLN1 soutient la protéostasie dépendante du lysosome, le trafic endolysosomal et la dynamique de la voie autophagie‑lysosome, avec des effets en aval sur le maintien des neurones et la fonction synaptique. La perte d’activité de PPT1 entraîne l’accumulation de substrats modifiés par des lipides et de matériel de stockage lysosomal, reliant cette voie à la biologie des céroïdes lipofuscinoses neuronales et, plus largement, aux mécanismes de neurodégénérescence et aux réponses cellulaires au stress.
CLN1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PPT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PPT1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PPT1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PPT1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.