Plasmide CRISPR/Cas9 KO CLEC-2D (h): sc-412035

Présentation

CLEC2D code pour la protéine CLEC-2D, un ligand de type lectine de type C de type II transmembranaire, qui module la surveillance immunitaire en se liant au récepteur inhibiteur KLRB1/CD161 exprimé par les cellules NK et certains sous-ensembles de lymphocytes T. Via cet axe, CLEC-2D peut influencer la fonction effectrice cytotoxique, la production de cytokines et la communication cellule–cellule aux interfaces entre le système immunitaire et les tissus. L’expression de CLEC2D est régulée de façon dynamique par le stress cellulaire et les états de différenciation, ce qui le relie à des voies impliquées dans l’échappement immunitaire, l’inflammation et les interactions tumeur–système immunitaire. Une dérégulation de la signalisation impliquant CLEC2D a été rapportée dans plusieurs cancers et contextes inflammatoires, ce qui étaye son intérêt en tant que nœud mécanistique pour étudier la régulation des cellules NK/T dans des systèmes humains.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CLEC-2D (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CLEC2D dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CLEC2D, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CLEC2D à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CLEC-2D.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CLEC2D pour l'étude de la signalisation de CLEC-2D, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CLEC2D essentiels à la fonction de CLEC-2D
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CLEC2D pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CLEC-2D plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CLEC-2D plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CLEC2D. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CLEC-2D plasmide HDR (h) et le CLEC-2D (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CLEC2D pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CLEC2D définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.