Plásmido CRISPR de Activación (h) claudin-9: sc-403166-ACT

CLDN9 codifica la claudina-9, una proteína de las uniones estrechas con cuatro dominios transmembrana que ayuda a establecer la integridad de la barrera epitelial y la permeabilidad paracelular selectiva. Como parte de las hebras de unión basadas en claudinas, la claudina-9 coordina la adhesión célula–célula y la polaridad apical–basal, y se acopla a andamiajes de la unión que conectan las uniones estrechas con la remodelación de actina y con programas de diferenciación epitelial. Los patrones alterados de expresión de claudinas se asocian con frecuencia con una función de barrera alterada, cambios en la organización tisular y fenotipos epitelio-mesenquimales que influyen en comportamientos relacionados con la invasión y la metástasis. Por ello, CLDN9 es relevante para estudiar el ensamblaje de las uniones estrechas, la morfogénesis epitelial y la desregulación de la barrera vinculada a enfermedades en modelos celulares humanos.

claudin-9 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CLDN9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

claudin-9 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CLDN9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CLDN9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de claudin-9. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CLDN9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de claudin-9 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía claudin-9 en células tumorales con expresión de CLDN9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.