Plasmide CRISPR d'Activation (h) claudin-4: sc-401284-ACT

CLDN4 code la claudine‑4, une protéine des jonctions serrées à quatre passages transmembranaires qui contribue à établir la fonction de barrière épithéliale et la polarité apico‑basale en régulant la perméabilité paracellulaire aux ions et aux solutés. La claudine‑4 participe à l’assemblage et au remodelage des jonctions serrées via des interactions avec des protéines d’échafaudage telles que des membres de la famille ZO, reliant les complexes jonctionnels au cytosquelette d’actine et à des réseaux de signalisation qui influencent la différenciation et l’organisation tissulaire. Une expression altérée de CLDN4 est fréquemment observée dans les cancers épithéliaux et est associée à des modifications de l’adhérence, à des programmes liés à la transition épithélio‑mésenchymateuse et à un comportement invasif. En outre, une composition dérégulée des jonctions serrées impliquant la claudine‑4 a été mise en cause dans des contextes inflammatoires et infectieux où l’intégrité de la barrière est compromise.

claudin-4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CLDN4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

claudin-4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CLDN4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CLDN4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de claudin-4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CLDN4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de claudin-4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie claudin-4 dans les cellules tumorales présentant une expression de CLDN4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.