CLASP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404219-ACT

CLASP1 (proteína 1 associada ao ligante citoplasmático) é uma proteína que rastreia a extremidade “plus” dos microtúbulos e estabiliza e organiza as redes de microtúbulos no córtex celular e nos cinetócoros, coordenando a montagem do fuso, o alinhamento cromossômico e a segregação fiel durante a mitose. Por meio de interações com proteínas EB, proteínas CLIP e fatores associados aos cinetócoros, a CLASP1 favorece o “rescue” dos microtúbulos e a instabilidade dinâmica, essenciais para a polaridade celular, o tráfego intracelular e a migração direcionada. A perturbação da dinâmica dos microtúbulos regulada por CLASP1 pode promover erros mitóticos e aneuploidia, ligando sua função a vias amplamente relevantes para o controle proliferativo e a estabilidade do genoma. Assim, a CLASP1 é frequentemente investigada em estudos de regulação do citoesqueleto, progressão do ciclo celular e mecanismos que conectam o comportamento dos microtúbulos à transformação celular e às respostas ao estresse.

CLASP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CLASP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CLASP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CLASP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CLASP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CLASP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CLASP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CLASP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CLASP1 em células tumorais com expressão de CLASP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.