Plasmide Double Nickase (m) citrin: sc-424510-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) citrin correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide citrin Double Nickase (m) et le plasmide citrin Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Slc25a13. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: citrin Antibody (D-7): sc-393303
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) citrin | sc-424510-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) citrin | sc-424510-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Slc25a13** code la citrine, un transporteur aspartate–glutamate de la membrane interne mitochondriale qui soutient la navette malate–aspartate et relie l’équilibre rédox cytosolique et mitochondrial au métabolisme intermédiaire. En échangeant l’aspartate et le glutamate à travers la membrane interne, la citrine contribue à coordonner le métabolisme des acides aminés, la gestion de l’azote liée au cycle de l’urée et le flux gluconéogénique via la disponibilité de l’aspartate. Une altération de la fonction de **SLC25A13** est associée à des phénotypes de dérégulation métabolique dans des systèmes modèles, ce qui fait de **Slc25a13** un point d’entrée utile pour étudier le transport mitochondrial, le métabolisme énergétique des hépatocytes et l’homéostasie systémique des nutriments. Chez la souris, la perturbation du transport dépendant de la citrine offre une approche aisément exploitable pour analyser les voies qui couplent l’activité des transporteurs mitochondriaux à l’état rédox et au métabolisme de l’azote.
citrin Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Slc25a13 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Slc25a13. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Slc25a13. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Slc25a13.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.