Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) CIN85: sc-402573-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CIN85 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CIN85 Double Nickase (h) et le plasmide CIN85 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant SH3KBP1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CIN85 Antibody (A-7): sc-166862
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CIN85 | sc-402573-NIC | 20 µg | $410.00 |
SH3KBP1 code pour CIN85, une protéine échafaudage multi-adaptatrice qui coordonne le trafic endocytique et l’atténuation des signaux en assemblant des complexes en aval des récepteurs à activité tyrosine kinase, dont l’EGFR, via des interactions avec les ligases d’ubiquitine Cbl et la machinerie endocytique. Grâce à ses domaines SH3 et à ses interfaces de liaison riches en prolines, CIN85 régule l’internalisation des récepteurs, leur ubiquitination et leur tri vers les lysosomes, modulant ainsi l’amplitude et la durée des voies de signalisation MAPK et PI3K-AKT. CIN85 contribue également au remodelage du cytosquelette, à la formation d’invadopodes et à la dynamique vésiculaire, des processus associés à la migration cellulaire et à des phénotypes invasifs dans divers contextes pathologiques. Des dérégulations des voies associées à CIN85 ont été étudiées en lien avec la signalisation oncogénique, le renouvellement des récepteurs immunitaires et des altérations du trafic membranaire.
CIN85 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SH3KBP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SH3KBP1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SH3KBP1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SH3KBP1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.