Plasmide CRISPR d'Activation (h) CIDE-A: sc-405086-ACT

CIDEA (cell death–inducing DFFA-like effector A) code la protéine CIDE-A associée aux gouttelettes lipidiques, un régulateur clé du stockage des lipides neutres et du métabolisme des adipocytes. Dans le tissu adipeux humain et les programmes liés à la graisse brune/beige, CIDE-A favorise la croissance et le remodelage des gouttelettes lipidiques et influence le renouvellement des triglycérides, en couplant la dynamique du stockage lipidique à l’activité mitochondriale et aux réseaux de gènes thermogéniques. L’expression et la fonction de CIDEA sont étroitement liées aux voies de l’homéostasie énergétique, notamment l’adipogenèse et les processus de prise en charge des lipides, et ont été associées à des phénotypes métaboliques tels que l’obésité, la résistance à l’insuline et des dérégulations lipidiques liées à la stéatose hépatique. En tant qu’effecteur métabolique dépendant du tissu et de l’état physiologique, CIDE-A est couramment étudiée pour ses rôles dans la différenciation adipocytaire, la biologie des gouttelettes lipidiques et les réponses au stress dans des cellules métaboliquement actives.

CIDE-A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CIDEA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CIDE-A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CIDEA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CIDEA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CIDE-A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CIDEA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CIDE-A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CIDE-A dans les cellules tumorales présentant une expression de CIDEA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.