Plasmide CRISPR d'Activation (h) CIB: sc-405501-ACT

CIB1 humain (calcium and integrin-binding protein 1) code la protéine CIB, un régulateur myristoylé de liaison au calcium de type « EF-hand » qui couple les signaux Ca²⁺ à l’adhérence dépendante des intégrines et au remodelage du cytosquelette. CIB1 participe à des réseaux de signalisation qui influencent la dynamique des adhésions focales, les réponses des plaquettes et des cellules endothéliales, ainsi que des voies d’adaptation au stress liées à la survie et à la migration cellulaires. Par ses interactions avec les queues cytoplasmiques des intégrines et d’autres protéines de signalisation, CIB1 peut moduler l’activité des kinases et des programmes transcriptionnels en aval qui affectent la prolifération et la motilité. Une expression ou une signalisation de CIB1 dérégulée a été rapportée dans des contextes pertinents pour la biologie vasculaire, les mécanismes liés à la thrombose et l’invasion/la métastase associées au cancer, ce qui appuie son utilisation comme cible mécanistique dans des études de voies.

CIB Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CIB1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CIB Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CIB1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CIB1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CIB. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CIB1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CIB au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CIB dans les cellules tumorales présentant une expression de CIB1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.