CHTOP Double Nickase Plasmid (h): sc-411874-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CHTOP Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CHTOP Double-Nickase-Plasmid (h) und CHTOP Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CHTOP abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CHTOP Double Nickase Plasmid (h) | sc-411874-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CHTOP Double Nickase Plasmid (h2) | sc-411874-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHTOP (chromatin target of PRMT1) ist ein konserviertes nukleäres Protein, das die Transkriptionsleistung mit der RNA-Prozessierung koppelt, indem es an der Assemblierung von messenger-Ribonukleoprotein-Komplexen (mRNP) und am mRNA-Export beteiligt ist. Es interagiert mit dem TREX-Komplex und weiteren RNA-bindenden Faktoren, um das ko-transkriptionelle Spleißen, die Reifung poly(A)+-RNA und den nukleozytoplasmatischen Transport zu unterstützen, und verknüpft so chromatinassoziierte Ereignisse mit Genexpressionsprogrammen. Durch seine Regulation des RNA-Stoffwechsels und epigenetikassoziierter Netzwerke wurde CHTOP in Kontexten untersucht, in denen veränderte Transkription und Export zu zellulären Stressantworten und aberranter Proliferation beitragen. Eine Dysregulation CHTOP-assoziierter Signalwege wurde in verschiedenen krankheitsrelevanten Modellen beschrieben, was CHTOP zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien der RNA-Prozessierung und Genomregulation macht.
CHTOP Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CHTOP-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CHTOP abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CHTOP-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CHTOP-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.