CHMP1B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406531

Panoramica

CHMP1B (charged multivesicular body protein 1B) è un componente fondamentale del macchinario ESCRT-III che guida gli eventi di rimodellamento di membrana necessari per lo smistamento endosomiale e la biogenesi dei corpi multivescicolari. Attraverso vie dipendenti da ESCRT, CHMP1B contribuisce alla downregulation dei recettori, al traffico verso i lisosomi, alle dinamiche di membrana legate all’autofagia e al completamento dell’abscissione durante la citocinesi. Una corretta attività di CHMP1B aiuta a mantenere l’omeostasi della proteostasi e della segnalazione regolando il destino dei carichi ubiquitinati e delle proteine di membrana. La disregolazione della funzione di ESCRT-III, inclusa un’alterazione del traffico dipendente da CHMP1B, è spesso studiata in contesti di processi neurodegenerativi, gemmazione virale e cambiamenti associati al cancro nella segnalazione dei recettori dei fattori di crescita.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CHMP1B (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CHMP1B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CHMP1B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CHMP1B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CHMP1B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CHMP1B per lo studio della segnalazione di CHMP1B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CHMP1B critici per la funzione di CHMP1B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CHMP1B per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CHMP1B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CHMP1B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CHMP1B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CHMP1B Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CHMP1B (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CHMP1B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CHMP1B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.