Particules Lentivirales d'Activation (h) CHD7: sc-404017-LAC

CHD7 code pour la protéine 7 de liaison à l’ADN de type chromodomaine hélicase (chromodomain helicase DNA-binding protein 7), un remodelageur de la chromatine dépendant de l’ATP qui lit les marques d’histones et régule le positionnement des nucléosomes afin de contrôler des programmes transcriptionnels au cours du développement et de la spécification des lignages. Il intègre les signaux épigénétiques avec l’accessibilité des enhancers et des promoteurs, influençant des processus tels que le développement de la crête neurale, la neurogenèse et la morphogenèse des organes par une modulation étendue des réseaux d’expression génique. L’activité de CHD7 recoupe des voies impliquées dans l’organisation de la chromatine, la transcription par l’ARN polymérase II et les décisions de destinée cellulaire. Une dysrégulation de la fonction de CHD7 est associée à des troubles du développement, dont le syndrome CHARGE, et fait l’objet d’études dans le contexte de phénotypes neurodéveloppementaux et congénitaux.

Les particules d'activation lentivirales CHD7 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CHD7 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CHD7 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CHD7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CHD7. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CHD7 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.