Plasmide CRISPR d'Activation (h) CHD7: sc-404017-ACT

CHD7 (chromodomain helicase DNA-binding protein 7) est un remodelleur de la chromatine dépendant de l’ATP, qui interprète les marques d’histones via ses chromodomaines afin de réguler l’accessibilité des enhancers et des promoteurs. Dans les cellules humaines, CHD7 coordonne des programmes transcriptionnels qui façonnent la spécification des lignages, le développement des crêtes neurales et l’organogenèse, en modulant le positionnement des nucléosomes et l’architecture de la chromatine d’ordre supérieur. La fonction de CHD7 s’articule avec des voies centrales de régulation épigénétique et transcriptionnelle, influençant l’expression génique dépendante de l’ARN polymérase II et les transitions d’état de la chromatine au cours de la différenciation. La perturbation génétique ou la modification du dosage de CHD7 est associée à des phénotypes de troubles du développement, notamment le syndrome CHARGE, et sa dérégulation est étudiée dans des réseaux transcriptionnels liés au neurodéveloppement et au cancer.

CHD7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CHD7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CHD7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CHD7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CHD7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CHD7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CHD7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CHD7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CHD7 dans les cellules tumorales présentant une expression de CHD7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.