CHAC1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-427280-ACT

Chac1 は、細胞質に局在する γ-グルタミル環化転移酵素である CHAC1 をコードし、グルタチオンを分解して細胞内のレドックスバランスを調節します。CHAC1 は統合ストレス応答（ISR）および小胞体ストレスに伴うアンフォールドタンパク質応答（UPR）によって誘導され、小胞体ストレスのシグナル伝達をアミノ酸の利用可能性、酸化ストレス、そして細胞運命の決定と結び付けます。グルタチオン量を低下させることで、CHAC1 は ROS 依存的なシグナル伝達や、フェロトーシス関連過程を含む脂質過酸化経路に対する感受性に影響し得ます。CHAC1 発現の異常は、神経変性、炎症、がん生物学に関連する細胞ストレス表現型と結び付けられており、マウス Chac1 はストレス適応的な転写プログラムの機構研究に有用な焦点分子です。

CHAC1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Chac1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CHAC1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Chac1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はChac1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CHAC1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のChac1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCHAC1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびChac1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCHAC1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。