Plasmide Double Nickase (h) CDKN3: sc-403243-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CDKN3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CDKN3 Double Nickase (h) et le plasmide CDKN3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CDKN3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CDKN3 Antibody (39): sc-135864
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CDKN3 | sc-403243-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CDKN3 | sc-403243-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDKN3 (cyclin-dependent kinase inhibitor 3) code une phosphatase à double spécificité qui module la progression du cycle cellulaire en déphosphorylant CDK1 et CDK2, influençant ainsi l’activité des complexes cycline-CDK et le contrôle des points de contrôle lors des transitions G1/S et G2/M. Par son impact sur l’entrée en mitose, la temporalité de la réplication de l’ADN et les programmes de prolifération, CDKN3 s’intègre aux principales voies de régulation du cycle cellulaire, notamment le contrôle transcriptionnel piloté par RB/E2F. Une expression dérégulée de CDKN3 a été rapportée dans de multiples contextes cancéreux et fait souvent l’objet d’études pour son association avec des signatures prolifératives, l’instabilité génomique et une altération de la fidélité des points de contrôle. En tant que régulateur du cycle cellulaire humain doté d’une activité phosphatase, CDKN3 est également pertinent pour des études mécanistiques de la régulation mitotique, des réponses au stress et des voies couplant la phosphorégulation à la prolifération.
CDKN3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CDKN3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CDKN3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CDKN3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CDKN3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.