CDKN3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403243-NIC

CDKN3（cyclin-dependent kinase inhibitor 3）は二重特異性ホスファターゼをコードし、CDK1およびCDK2を脱リン酸化することで細胞周期進行を調節し、サイクリン-CDK活性やG1/SおよびG2/M移行時のチェックポイント制御に影響を与えます。有糸分裂への進入、DNA複製のタイミング、増殖プログラムへの作用を通じて、CDKN3はRB/E2Fによる転写制御を含む中核的な細胞周期制御経路と統合的に連関します。CDKN3の発現異常は複数のがん種で報告されており、増殖シグネチャー、ゲノム不安定性、チェックポイントの忠実性の変化との関連で頻繁に研究されています。ホスファターゼ活性をもつヒト細胞周期制御因子として、CDKN3は有糸分裂制御、ストレス応答、リン酸化制御と増殖を結び付ける経路の機構研究にも重要です。

CDKN3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CDKN3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CDKN3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CDKN3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CDKN3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。