Plasmide Double Nickase (h) Cdk5: sc-400161-NIC

La kinase 5 dépendante des cyclines (CDK5) code Cdk5, une sérine/thréonine kinase dirigée vers les résidus proline, activée par des cofacteurs non cyclines tels que p35 (CDK5R1) et p39 (CDK5R2). Dans les cellules humaines, Cdk5 régule le développement neuronal, la signalisation synaptique, le remodelage du cytosquelette, le trafic vésiculaire et des cascades de phosphorylation indépendantes du cycle cellulaire, via des substrats qui croisent les voies MAPK, PI3K/AKT et de réponse au stress. Une activité de Cdk5 dérégulée et une phosphorylation aberrante de ses substrats ont été associées à des processus neurodégénératifs, notamment la pathologie tau, ainsi qu'à des programmes de migration et de survie altérés dans divers contextes pathologiques. Parce que CDK5 influence à la fois la dynamique de signalisation et la plasticité structurelle, il est largement étudié dans des modèles de neurobiologie, de réponse aux dommages de l'ADN et de dialogue entre voies de signalisation orchestré par des réseaux de kinases.

Cdk5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CDK5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CDK5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CDK5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CDK5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.