Plasmide CRISPR d'Activation (h) Cdc37: sc-401574-ACT

CDC37 code Cdc37, un co-chaperon HSP90 conservé qui sert d’échafaudage aux kinases clientes et soutient leur repliement, leur stabilisation et leur maturation en complexes de signalisation actifs. En coordonnant les interactions entre HSP90 et les protéines kinases, Cdc37 contribue au maintien de la protéostasie et influence des voies clés telles que MAPK/ERK, PI3K–AKT et le contrôle des points de contrôle du cycle cellulaire. Une expression ou une fonction altérée de CDC37 peut déplacer l’équilibre des réseaux de kinases, avec des répercussions sur les réponses au stress, les programmes de prolifération et la stabilité du protéome. Ces propriétés font de CDC37 un nœud utile pour étudier la régulation, dépendante des chaperons, de la signalisation oncogénique et de l’adaptation au stress, sans présumer de retombées cliniques.

Cdc37 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CDC37 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Cdc37 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CDC37 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CDC37, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Cdc37. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CDC37 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Cdc37 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Cdc37 dans les cellules tumorales présentant une expression de CDC37 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.