Plasmide Double Nickase (h) CD98: sc-400501-NIC

SLC3A2 code pour CD98 (également appelé chaîne lourde 4F2), une glycoprotéine membranaire de type II qui forme un hétérodimère avec les chaînes légères SLC7 afin de soutenir le transport des acides aminés et la détection cellulaire des nutriments. CD98 module également l'adhésion et la signalisation dépendantes des intégrines, reliant le transport membranaire à l'organisation du cytosquelette, à la prolifération et à des voies de survie telles que PI3K–AKT et MAPK. Par ces fonctions, SLC3A2 influence l'équilibre rédox et les programmes métaboliques régulés par mTORC1, qui façonnent la croissance et les réponses au stress. Une expression et une signalisation de CD98 dérégulées ont été associées à des altérations de la migration cellulaire, de l'activation des cellules immunitaires et à des caractéristiques de la biologie tumorale, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques portant sur le métabolisme et la signalisation de l'adhérence.

CD98 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SLC3A2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SLC3A2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SLC3A2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SLC3A2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.