Plasmide CRISPR/Cas9 KO CD88 (m): sc-419395

Présentation

C5ar1 code CD88, le récepteur canonique couplé aux protéines G pour l’anaphylatoxine du complément C5a, et il est fortement exprimé à la surface des cellules de la lignée myéloïde, notamment les neutrophiles, les monocytes et les macrophages. Lors de la liaison au ligand, CD88 active une signalisation dépendante de Gi qui induit la chimiotaxie, la mobilisation du calcium, les voies MAPK et PI3K, l’explosion oxydative et la production de cytokines, intégrant les signaux du complément à l’activation de l’immunité innée. Ce récepteur participe à l’amplification de l’inflammation et au recrutement des leucocytes, en interagissant avec la signalisation des récepteurs Fc et les voies de reconnaissance des motifs afin de moduler les réponses de lésion tissulaire et de réparation. Une dérégulation de la signalisation C5a–CD88 a été impliquée dans des modèles de sepsis, d’inflammation auto-immune, de lésion d’ischémie-reperfusion et de neuroinflammation, faisant de C5ar1 un nœud utile pour des études mécanistiques en immunopathologie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CD88 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène C5ar1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du C5ar1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert C5ar1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CD88.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en C5ar1 pour l'étude de la signalisation de CD88, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de C5ar1 essentiels à la fonction de CD88
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de C5ar1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CD88 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CD88 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus C5ar1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CD88 plasmide HDR (m) et le CD88 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie C5ar1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles C5ar1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.