Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD88: sc-401968-ACT

C5AR1 code pour CD88, un récepteur couplé aux protéines G de l’anaphylatoxine du complément C5a, qui relie la détection immunitaire innée à une activation rapide des leucocytes. La signalisation de CD88 déclenche des voies dépendantes de Gαi, notamment PI3K–AKT, MAPK/ERK et NF-κB, favorisant la chimiotaxie, la dégranulation, le burst oxydatif et la libération de cytokines dans les lignées myéloïdes. Par ces mécanismes, CD88 contribue à coordonner l’inflammation induite par le complément et le trafic des leucocytes au sein des microenvironnements tissulaires. Une activité dérégulée de C5AR1 a été associée à des contextes inflammatoires et auto-immuns, à des cascades inflammatoires de type septicémique et à la biologie myéloïde associée aux tumeurs, ce qui en fait une cible pertinente pour des études de mécanistique en immunologie.

CD88 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de C5AR1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD88 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus C5AR1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription C5AR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD88. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus C5AR1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD88 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD88 dans les cellules tumorales présentant une expression de C5AR1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.