Plasmide Double Nickase (h) CD8-α: sc-400372-NIC

CD8A code pour CD8-α, une glycoprotéine transmembranaire de type I qui forme des homodimères CD8αα ou des hétérodimères CD8αβ à la surface des lymphocytes T ainsi que d'un sous-ensemble de cellules NK. CD8-α agit comme corécepteur de la reconnaissance antigénique restreinte au CMH de classe I en s'associant au complexe du TCR et en recrutant LCK afin d'amplifier la signalisation proximale du TCR, favorisant la différenciation des effecteurs cytotoxiques et la formation de la synapse immunologique. Par son influence sur des voies en aval telles que la phosphorylation de ZAP70, la signalisation MAPK et des programmes transcriptionnels dépendants du calcium, CD8A contribue à façonner les réponses spécifiques de l'antigène et la surveillance immunitaire. Les modifications de l'expression de CD8A et les profils d'infiltration des lymphocytes T CD8+ sont largement utilisés comme corrélats immunologiques dans les études sur l'infection, l'auto-immunité et le microenvironnement tumoral, et éclairent les mécanismes d'échappement immunitaire et de dysfonction des cellules T.

CD8-α Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CD8A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CD8A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CD8A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CD8A.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.