Plásmido CRISPR de Activación (h) CD79A: sc-401827-ACT

CD79A codifica la subunidad Ig-α del complejo del receptor de antígeno de los linfocitos B (BCR), que se asocia con CD79B para acoplar el reconocimiento del antígeno a la señalización intracelular. Sus motivos de activación basados en tirosina del inmunorreceptor (ITAM) se fosforilan para iniciar cascadas dependientes de SYK que activan las vías PI3K–AKT, BTK, NF-κB y MAPK, modulando la activación, proliferación y supervivencia de los linfocitos B. La expresión de CD79A está estrechamente ligada a la identidad de linaje de los linfocitos B e influye en la selección impulsada por antígenos durante el desarrollo y la diferenciación. La desregulación de la señalización del BCR y la actividad alterada de CD79A se han implicado en disfunción inmunitaria derivada de linfocitos B y en la biología de enfermedades hematológicas, lo que respalda su uso como marcador mecanístico en investigación en inmunología y oncología.

CD79A El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CD79A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CD79A El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CD79A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CD79A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD79A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CD79A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD79A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD79A en células tumorales con expresión de CD79A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.