Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD79A: sc-401827-ACT

CD79A code la sous-unité Ig-α du complexe du récepteur de l’antigène des lymphocytes B (BCR), qui s’associe à CD79B pour coupler la reconnaissance de l’antigène à la signalisation intracellulaire. Ses motifs d’activation à base de tyrosine de type immunorécepteur (ITAM) sont phosphorylés, ce qui initie des cascades dépendantes de SYK mobilisant les voies PI3K–AKT, BTK, NF-κB et MAPK, et modulant l’activation, la prolifération et la survie des lymphocytes B. L’expression de CD79A est étroitement liée à l’identité de la lignée B et influence la sélection induite par l’antigène au cours du développement et de la différenciation. Une signalisation du BCR dérégulée et une activité altérée de CD79A sont impliquées dans les dysfonctionnements immunitaires d’origine B et dans la biologie des maladies hématologiques, ce qui étaye son utilisation comme marqueur mécanistique en recherche en immunologie et en oncologie.

CD79A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CD79A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD79A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CD79A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CD79A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD79A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CD79A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD79A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD79A dans les cellules tumorales présentant une expression de CD79A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.