Plasmide Double Nickase (h) CD72: sc-404054-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CD72 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CD72 Double Nickase (h) et le plasmide CD72 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CD72. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CD72 Antibody (G-5): sc-25265
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CD72 | sc-404054-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CD72 | sc-404054-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CD72 est une glycoprotéine transmembranaire de type II, exprimée de façon restreinte aux lymphocytes B, qui agit comme co‑récepteur immunorégulateur en couplant les signaux du récepteur de l’antigène à des voies inhibitrices intracellulaires. Via la phosphorylation d’un motif inhibiteur à base de tyrosine des immunorécepteurs (ITIM) et le recrutement de phosphatases telles que SHP‑1/SHIP, CD72 module les seuils d’activation induits par le BCR, les flux calciques ainsi que la signalisation MAPK et PI3K en aval. CD72 se lie également au ligand de la famille des sémaphorines SEMA4D (CD100), influençant les interactions lymphocytes B–lymphocytes T, les réponses des centres germinatifs et la tolérance périphérique. Une signalisation CD72 dysrégulée a été associée à des altérations de l’homéostasie des lymphocytes B et à l’auto-immunité, et son expression ainsi que le contexte de ses voies de signalisation sont fréquemment étudiés en biologie des hémopathies malignes B et dans les travaux sur le microenvironnement immunitaire.
CD72 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CD72 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CD72. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CD72. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CD72.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.