Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD72: sc-404054-ACT

CD72 est une glycoprotéine transmembranaire de type II, exprimée de façon restreinte aux lymphocytes B, qui agit comme corécepteur inhibiteur afin d’ajuster les seuils de signalisation du récepteur des lymphocytes B (BCR) et de maintenir l’homéostasie immunitaire. Via son motif ITIM cytoplasmique, CD72 recrute des phosphatases telles que SHP-1 pour atténuer les cascades de kinases proximales et moduler des voies en aval, notamment MAPK et NF-κB, influençant l’activation, la prolifération et la tolérance des lymphocytes B. CD72 participe également à des interactions régulatrices avec des ligands tels que SEMA4D/CD100, intégrant des signaux qui affectent les réponses induites par l’antigène et la dynamique des centres germinatifs. Une expression ou une signalisation dérégulée de CD72 a été associée à une altération de la fonction des lymphocytes B et présente un intérêt pour l’étude de l’auto-immunité, des hémopathies malignes d’origine B et de la régulation des points de contrôle immunitaires dans le microenvironnement tumoral.

CD72 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CD72 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD72 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CD72 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CD72, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD72. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CD72 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD72 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD72 dans les cellules tumorales présentant une expression de CD72 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.