CD57 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402750-ACT

B3GAT1, comumente associado ao epítopo carboidrato CD57 (HNK-1), codifica uma β-1,3-glucuroniltransferase que contribui para a biossíntese de estruturas glicânicas HNK-1 em glicoproteínas e glicolipídios da superfície celular. Esse programa de glicosilação sustenta o reconhecimento célula–célula, a adesão e a sinalização em contextos neurodesenvolvimentais e imunológicos, influenciando processos como o crescimento de neuritos, a organização sináptica e a diferenciação de linfócitos. Glicanos associados a CD57/HNK-1 são amplamente usados como marcadores de subpopulações maduras de células NK e T e têm sido relacionados a alterações na remodelação de glicanos em fenótipos neurológicos e inflamatórios. A glicosilação dependente de B3GAT1, quando desregulada, pode perturbar interações com a matriz extracelular e vias de sinalização de receptores que dependem de um padrão glicânico preciso.

CD57 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de B3GAT1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD57 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus B3GAT1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição B3GAT1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD57. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus B3GAT1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD57 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD57 em células tumorais com expressão de B3GAT1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.