Plasmide CRISPR d'Activation (m) CD55: sc-419939-ACT

Cd55 code pour CD55 (facteur accélérateur de la décroissance), un régulateur de surface ancré au glycosylphosphatidylinositol (GPI) qui protège les cellules de l’hôte des lésions médiées par le complément en accélérant la dissociation des convertases C3/C5. En limitant l’amplification du complément, CD55 influence la signalisation de l’immunité innée, la dynamique d’opsonisation et les interactions inflammatoires aux barrières tissulaires ainsi qu’au sein du compartiment vasculaire. Dans des modèles murins, une activité altérée de CD55 est associée à une activation dérégulée du complément, susceptible de moduler la sensibilité aux pathologies d’origine immunitaire, l’issue des infections et les interactions tumeur–système immunitaire. Son expression est donc pertinente pour l’étude du contrôle du complément, des interactions leucocytes–endothélium et de l’inflammation du microenvironnement.

CD55 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Cd55 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD55 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Cd55 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Cd55, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD55. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Cd55 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD55 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD55 dans les cellules tumorales présentant une expression de Cd55 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.