Plasmide CRISPR/Cas9 KO CD48 (m): sc-419559

Présentation

Le gène murin *Cd48* code CD48, un récepteur de la superfamille des immunoglobulines ancré par un glycosylphosphatidylinositol (GPI), largement exprimé sur les cellules hématopoïétiques et impliqué dans l’adhésion et la costimulation des cellules immunitaires. CD48 interagit avec CD2 ainsi qu’avec 2B4 (CD244), un récepteur de la famille SLAM, modulant la formation de la synapse immunologique et ajustant les seuils d’activation des lymphocytes T, des cellules NK et des cellules présentatrices d’antigènes. Par ces interactions, CD48 influence la production de cytokines, la fonction effectrice cytotoxique et le trafic leucocytaire au sein des microenvironnements inflammatoires. Une dérégulation de l’expression et de la signalisation de CD48 a été associée à des altérations de l’homéostasie immunitaire dans des modèles d’auto-immunité, d’inflammation chronique, d’infection et dans la biologie des hémopathies malignes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CD48 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cd48 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cd48, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cd48 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CD48.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cd48 pour l'étude de la signalisation de CD48, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Cd48 essentiels à la fonction de CD48
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cd48 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CD48 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CD48 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cd48. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CD48 plasmide HDR (m) et le CD48 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cd48 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cd48 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.