CD46 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400968-ACT

O CD46 humano (proteína cofator de membrana) é uma glicoproteína reguladora do complemento amplamente expressa que protege as células do hospedeiro contra lesões mediadas pelo complemento ao atuar como cofator para a clivagem de C3b e C4b dependente do fator I. Além do controle do complemento, o CD46 influencia a sinalização celular e a modulação imune, incluindo a regulação da ativação e diferenciação de células T e a integração com vias inflamatórias. O CD46 também funciona como receptor celular para múltiplos patógenos, relacionando sua expressão às interações hospedeiro–patógeno e à imunidade de mucosas. A atividade ou expressão desregulada de CD46 está associada a patologia impulsionada pelo complemento e à disfunção imune, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos em imunologia, biologia de infecções e sinalização de superfície celular.

CD46 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CD46 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD46 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CD46 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CD46, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD46. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CD46 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD46 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD46 em células tumorais com expressão de CD46 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.