Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD42c: sc-403712-ACT

GP1BB code la glycoprotéine Ib bêta (CD42c), une sous-unité essentielle du complexe récepteur plaquettaire GPIb-IX-V, qui médie l’adhésion des plaquettes au facteur von Willebrand dans des conditions de fort cisaillement. Par une signalisation coordonnée avec les autres composants du complexe, CD42c favorise l’accrochage des plaquettes, leur activation et les réarrangements du cytosquelette, influençant ainsi la formation du thrombus et les réponses hémostatiques. Une perturbation ou une expression altérée de GP1BB compromet l’assemblage et la fonction du récepteur à la surface des plaquettes, associant cette voie à des défauts héréditaires d’adhésion plaquettaire et à des phénotypes hémorragiques anormaux. Par conséquent, la régulation de GP1BB est fréquemment étudiée dans des modèles de mégacaryopoïèse, de biogenèse plaquettaire et de signalisation plaquettaire dépendante du cisaillement.

CD42c Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GP1BB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD42c Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GP1BB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GP1BB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD42c. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GP1BB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD42c au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD42c dans les cellules tumorales présentant une expression de GP1BB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.