CD40 Plasmide Double Nickase (m): sc-423444-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CD40 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CD40 Double Nickase Plasmid (m) e il CD40 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Cd40. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CD40 Antibody (HM40-3): sc-20010
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CD40 Plasmide Double Nickase (m) | sc-423444-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino *Cd40* codifica CD40, un membro della superfamiglia dei recettori del TNF espresso sulle cellule presentanti l’antigene e su altri sottotipi immunitari, dove media la comunicazione costimolatoria con CD40L per coordinare le risposte immunitarie adattative. La segnalazione di CD40 recluta proteine adattatrici TRAF per attivare le vie NF-κB canonica e non canonica, MAPK e PI3K, inducendo la produzione di citochine, programmi di presentazione dell’antigene e decisioni di sopravvivenza cellulare. Nelle cellule B, CD40 contribuisce alla formazione dei centri germinativi, alla ricombinazione di switch di classe e alla maturazione dell’affinità, mentre nelle cellule mieloidi modula l’attivazione infiammatoria e il dialogo con le cellule T. Un’attività deregolata dell’asse CD40 è implicata in fenotipi autoimmuni e infiammatori cronici, nelle risposte immunitarie legate ai trapianti e nel rimodellamento del microambiente immunitario tumorale, rendendolo un bersaglio comune negli studi di immunologia meccanicistica.
CD40 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Cd40 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Cd40. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Cd40. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Cd40 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.