Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD4: sc-400237-ACT

Le CD4 humain code une glycoprotéine transmembranaire de type I principalement exprimée par les lymphocytes T auxiliaires ainsi que par certains sous-ensembles de cellules dendritiques et de macrophages, où il agit comme corécepteur en stabilisant les interactions TCR–CMH de classe II et en renforçant la signalisation proximale via LCK. La signalisation dépendante de CD4 influence l’activation et la différenciation des lymphocytes T, ainsi que les programmes de cytokines qui façonnent les réponses immunitaires adaptatives, y compris les voies contrôlant la présentation de l’antigène et la formation de la synapse immunologique. Une expression ou une fonction dérégulée de CD4 est associée à une homéostasie immunitaire altérée dans des contextes inflammatoires et auto-immuns, et occupe une place centrale dans les études des interactions hôte–pathogène en raison de son rôle dans le tropisme des cellules immunitaires. En tant que marqueur de lignée à la surface cellulaire, CD4 est également largement utilisé pour stratifier les sous-populations immunitaires en immuno-oncologie et en recherche en immunologie des systèmes.

CD4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CD4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CD4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CD4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CD4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD4 dans les cellules tumorales présentant une expression de CD4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.