Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD38: sc-401117-ACT

Le CD38 humain code une glycoprotéine transmembranaire de type II multifonctionnelle, qui agit à la fois comme ectoenzyme et comme récepteur, en catalysant le métabolisme du NAD+ pour générer des médiateurs de signalisation tels que l’ADP-ribose cyclique et l’ADP-ribose. En régulant la mobilisation intracellulaire du Ca2+ et la signalisation dépendante du NAD+, CD38 influence l’activation des cellules immunitaires, l’adhésion et la communication au sein des microenvironnements inflammatoires. L’activité de CD38 recoupe des voies qui contrôlent le métabolisme cellulaire et les réponses au stress, et les altérations d’expression sont fréquemment étudiées dans des contextes de dysrégulation immunitaire et de biologie des hémopathies malignes. En tant que marqueur de surface et nœud de signalisation, CD38 est couramment étudié pour son rôle dans la différenciation des lymphocytes, la fonction des cellules myéloïdes et les interactions tumeur–système immunitaire.

CD38 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CD38 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD38 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CD38 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CD38, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD38. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CD38 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD38 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD38 dans les cellules tumorales présentant une expression de CD38 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.