Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD34: sc-400197-ACT

Le CD34 humain code une sialomucine transmembranaire fortement glycosylée, qui constitue un marqueur canonique des cellules souches et progénitrices hématopoïétiques et qui est également exprimée par les cellules endothéliales vasculaires. CD34 contribue à l’adhésion et au trafic cellulaires en modulant les interactions avec les sélectines et les composants de la matrice extracellulaire, influençant l’homing, la migration et la rétention dans la niche au sein des tissus hématopoïétiques. Son expression est régulée de manière dynamique au cours de la différenciation et est couramment utilisée pour définir des populations de type souche et enrichies en progéniteurs en hématopoïèse et en biologie vasculaire. Des profils d’expression de CD34 altérés sont fréquemment observés dans diverses pathologies hématologiques et vasculaires, ce qui étaye son utilité pour des études mécanistiques de l’état de lignée, des interactions avec le microenvironnement et du remodelage associé aux maladies.

CD34 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CD34 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD34 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CD34 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CD34, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD34. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CD34 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD34 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD34 dans les cellules tumorales présentant une expression de CD34 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.