Plásmido CRISPR de Activación (h) CD3-δ: sc-401519-ACT

CD3D codifica CD3-δ, un componente central del complejo receptor de células T (TCR)–CD3, necesario para la activación de las células T dependiente de antígeno y la propagación de señales. CD3-δ participa en el ensamblaje y la expresión en superficie del complejo TCR y transduce señales a través de su motivo ITAM citoplasmático, reclutando LCK/ZAP70 y vías posteriores como LAT/SLP-76, PLCγ1–NFAT, NF-κB y MAPK/ERK para coordinar programas de proliferación y de citocinas. Las alteraciones en la expresión o la función de CD3D pueden perturbar el desarrollo de timocitos, la competencia de señalización del TCR y la homeostasis inmunitaria, por lo que es relevante para estudios de inmunodeficiencia, desregulación inmunitaria e interacciones tumor-inmunidad. Como marcador definitorio del linaje de células T, CD3-δ también se utiliza ampliamente para modelar umbrales de señalización del receptor y estados de activación en células inmunitarias humanas.

CD3-δ El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CD3D sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CD3-δ El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CD3D en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CD3D, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD3-δ. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CD3D y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD3-δ en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD3-δ en células tumorales con expresión de CD3D silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.