Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD27: sc-401938-ACT

CD27 code une molécule de costimulation appartenant à la superfamille des récepteurs du TNF, exprimée principalement sur les lymphocytes T, les lymphocytes B mémoire et certains sous-ensembles de cellules NK, où elle se lie à CD70 pour amplifier l’activation des lymphocytes induite par l’antigène. La signalisation de CD27 mobilise les voies NF-κB canonique et non canonique, ainsi que les cascades MAPK et PI3K/AKT, soutenant la prolifération, la survie, la production de cytokines et le développement d’une mémoire immunitaire durable. De par son rôle dans l’orientation des réponses effectrices et mémoire, une activité CD27/CD70 altérée a été associée à une dérégulation immunitaire et à des microenvironnements inflammatoires, et l’expression de CD27 est fréquemment utilisée pour phénotyper les états de différenciation des lymphocytes. Ces propriétés font de CD27 un nœud utile pour étudier les réseaux de signalisation de l’immunité adaptative, la costimulation cellule–cellule et les dysfonctionnements immunitaires dépendants du contexte.

CD27 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CD27 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD27 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CD27 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CD27, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD27. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CD27 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD27 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD27 dans les cellules tumorales présentant une expression de CD27 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.