Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD26: sc-400862-ACT

DPP4 code pour CD26, une glycoprotéine transmembranaire de type II dotée d’une activité de dipeptidyl-peptidase, qui tronque certaines chimiokines, incrétines et autres peptides bioactifs, modulant ainsi les gradients de signalisation extracellulaire et le trafic des cellules immunitaires. Au-delà de son rôle enzymatique, CD26 participe à la co‑stimulation et à des processus liés à l’adhésion via des interactions avec la matrice extracellulaire et des partenaires de surface cellulaire, influençant l’activation des lymphocytes T et les réponses inflammatoires. Dans les tissus humains, l’expression de DPP4/CD26 a été associée à des voies impliquées dans la migration des leucocytes, la signalisation des cytokines et la régulation métabolique. Une activité ou une expression dérégulée de CD26 est étudiée dans des contextes tels que l’inflammation d’origine immunitaire, la biologie du microenvironnement tumoral et les mécanismes des maladies métaboliques.

CD26 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DPP4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD26 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DPP4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DPP4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD26. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DPP4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD26 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD26 dans les cellules tumorales présentant une expression de DPP4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.