Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD21: sc-401352-ACT

CR2 code pour CD21, un récepteur du complément exprimé principalement sur les lymphocytes B et les cellules dendritiques folliculaires, qui se lie aux antigènes opsonisés par C3d et coopère avec CD19 et CD81 afin d’abaisser le seuil d’activation de la signalisation du récepteur des cellules B. Grâce à cette fonction de co‑récepteur, CD21 intègre le marquage par le complément à l’immunité adaptative, en modulant la capture des antigènes, les réactions du centre germinatif et les réponses en anticorps. CD21 sert également de facteur d’attachement cellulaire au virus d’Epstein–Barr, reliant la biologie de CR2 à des voies impliquées dans l’entrée virale et l’activation immunitaire en aval. Une activité dérégulée de CR2/CD21 a été associée à une immunité humorale altérée et à des phénotypes inflammatoires pertinents pour l’auto-immunité et les mécanismes pathogéniques des maladies médiées par les lymphocytes B.

CD21 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CR2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD21 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CR2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CR2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD21. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CR2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD21 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD21 dans les cellules tumorales présentant une expression de CR2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.