CD203c Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404517
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- CD203c O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico CD203c, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:CD203c Anticorpo (1G11): sc-293363
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
CD203c Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-404517 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
ENPP3 codifica a ectonucleotídeo pirofosfatase/fosfodiesterase 3 (CD203c), uma ectoenzima transmembrana do tipo II que hidrolisa substratos nucleotídicos extracelulares para modular a sinalização purinérgica e o equilíbrio local de fosfato/pirofosfato. O CD203c é fortemente expresso em basófilos e mastócitos e é rapidamente induzido após ativação mediada por FcεRI, conectando o metabolismo de nucleotídeos a programas de degranulação e sinalização inflamatória. Ao regular os nucleotídeos extracelulares, a ENPP3 influencia a dinâmica de sinalização na superfície celular, a liberação de citocinas e a comunicação entre células imunes em microambientes teciduais. A expressão alterada de ENPP3/CD203c tem sido associada a desregulação imune e é amplamente utilizada como marcador funcional em estudos de inflamação alérgica e estados relacionados de ativação de células imunes.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CD203c (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene ENPP3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do ENPP3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do ENPP3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CD203c.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de ENPP3 para a investigação da sinalização de CD203c, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) ENPP3 críticos para a função CD203c
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos ENPP3 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo CD203c Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo CD203c Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus ENPP3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo CD203c Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR CD203c (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia ENPP3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo ENPP3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.