Plasmide CRISPR/Cas9 KO CD203c (h): sc-404517

Présentation

ENPP3 code l’ectonucléotide pyrophosphatase/phosphodiestérase 3 (CD203c), une ectoenzyme transmembranaire de type II qui hydrolyse des substrats nucléotidiques extracellulaires afin de moduler la signalisation purinergique et l’équilibre local phosphate/pyrophosphate. CD203c est fortement exprimée à la surface des basophiles et des mastocytes et est rapidement surexprimée lors d’une activation médiée par FcεRI, établissant un lien entre le métabolisme des nucléotides et les programmes de dégranulation et de signalisation inflammatoire. En régulant les nucléotides extracellulaires, ENPP3 influence la dynamique de la signalisation à la surface cellulaire, la libération de cytokines et la communication entre cellules immunitaires au sein des microenvironnements tissulaires. Une expression altérée d’ENPP3/CD203c a été associée à une dysrégulation immunitaire et CD203c est largement utilisée comme marqueur fonctionnel dans les études de l’inflammation allergique et des états d’activation des cellules immunitaires associés.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CD203c (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ENPP3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ENPP3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ENPP3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CD203c.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ENPP3 pour l'étude de la signalisation de CD203c, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ENPP3 essentiels à la fonction de CD203c
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ENPP3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CD203c plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CD203c plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ENPP3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CD203c plasmide HDR (h) et le CD203c (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ENPP3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ENPP3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.