Plasmide Double Nickase (h) CD19: sc-400719-NIC

CD19 est une glycoprotéine transmembranaire restreinte aux lymphocytes B, qui agit comme corécepteur en amplifiant la signalisation du récepteur des lymphocytes B (BCR) en organisant des complexes de signalisation avec CD21 et CD81. En modulant les voies PI3K–AKT, MAPK/ERK et celles dépendantes du calcium, CD19 contribue à définir les seuils d’activation qui gouvernent la prolifération et la différenciation des lymphocytes B, ainsi que les réponses en anticorps. L’expression de CD19 est étroitement liée à l’engagement dans la lignée B et à la dynamique des centres germinatifs, et sa dérégulation est fréquemment utilisée comme caractéristique moléculaire dans les études sur les hémopathies malignes B et les pathologies à médiation immunitaire. En tant que marqueur de surface aux rôles de signalisation bien définis, CD19 constitue un point d’entrée exploitable pour disséquer les réseaux de signalisation des lymphocytes B et la sélection induite par l’antigène.

CD19 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CD19 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CD19. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CD19. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CD19.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.