Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD19: sc-400719-ACT

Le CD19 humain est une glycoprotéine transmembranaire restreinte aux lymphocytes B, qui agit comme corécepteur au sein du complexe du récepteur des lymphocytes B (BCR), en abaissant les seuils d’activation et en modulant l’activation dépendante de l’antigène. En s’associant à des kinases et à des protéines adaptatrices, CD19 régule l’activité des voies PI3K–AKT, MAPK/ERK et NF-κB, influençant les programmes de prolifération, de survie et de différenciation des lymphocytes B en développement comme matures. La dynamique de son expression contribue à définir l’identité de la lignée B et à réguler les réponses immunitaires humorales, notamment les réactions des centres germinatifs et la production d’immunoglobulines. Une expression ou une signalisation de CD19 dérégulée a été associée à des altérations de l’homéostasie des lymphocytes B et est fréquemment étudiée dans le contexte des hémopathies malignes B et des dysfonctionnements immunitaires.

CD19 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CD19 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD19 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CD19 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CD19, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD19. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CD19 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD19 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD19 dans les cellules tumorales présentant une expression de CD19 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.