Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD164: sc-404397-ACT

Le CD164 humain code une protéine de surface cellulaire de type sialomucine, fortement glycosylée, qui régule l’adhésion et la migration cellulaires ainsi que le trafic des progéniteurs hématopoïétiques au sein de la niche médullaire. CD164 participe à des processus de signalisation proches de la membrane et d’endocytose, qui influencent les interactions dépendantes des intégrines et les déplacements guidés par les chimiokines, avec des liens fonctionnels vers des voies impliquées dans le maintien des cellules souches et des comportements de type transition épithélio-mésenchymateuse. Une expression altérée de CD164 a été associée à des modifications de l’invasivité des cellules tumorales et du potentiel métastatique dans de nombreux cancers, et il est fréquemment étudié comme marqueur de la biologie des progéniteurs et de la régulation par le microenvironnement. Ces propriétés font de CD164 une cible utile pour disséquer, dans des modèles cellulaires humains, les mécanismes d’adhésion à la niche, de motilité et de fonction des récepteurs dépendante de la glycosylation.

CD164 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CD164 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD164 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CD164 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CD164, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD164. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CD164 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD164 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD164 dans les cellules tumorales présentant une expression de CD164 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.