Plásmido CRISPR de Activación (h) CD151: sc-401969-ACT

CD151 (tetraspanina-24) es una tetraspanina humana de superficie celular que organiza microdominios enriquecidos en tetraspaninas y modula el tráfico y la señalización de receptores asociados, en particular integrinas de unión a laminina como ITGA3/ITGB1 e ITGA6/ITGB4. A través de estos complejos, CD151 influye en la adhesión célula–célula y célula–matriz, la remodelación del citoesqueleto y la migración direccional, afectando procesos como la integridad epitelial, las respuestas angiogénicas y la motilidad de células inmunitarias. La señalización asociada a CD151 se entrecruza con la dinámica de las adhesiones focales y con vías posteriores vinculadas a la regulación de la actina y al crosstalk entre receptores, moldeando el comportamiento invasivo en múltiples contextos celulares. La expresión desregulada de CD151 o el acoplamiento alterado tetraspanina–integrina se ha asociado, en sistemas experimentales, con fenotipos relevantes para la diseminación de células tumorales, la competencia metastásica y la remodelación vascular.

CD151 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CD151 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CD151 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CD151 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CD151, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD151. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CD151 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD151 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD151 en células tumorales con expresión de CD151 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.