Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD14: sc-400344-ACT

Le CD14 humain code un co-récepteur ancré au glycosylphosphatidylinositol (GPI), principalement exprimé par les monocytes, les macrophages et les neutrophiles, qui renforce la reconnaissance innée du lipopolysaccharide (LPS) bactérien et d’autres ligands associés aux pathogènes. CD14 coopère avec TLR4–MD-2 et la LBP pour favoriser une signalisation dépendante de MyD88 et de TRIF, déclenchant des programmes transcriptionnels inflammatoires médiés par NF-κB et les IRF, ainsi que la production de cytokines. En tant que régulateur de la détection des endotoxines et des états d’activation myéloïdes, les modifications d’expression de CD14 et la dynamique de sa signalisation sont fréquemment étudiées dans le contexte de la biologie des infections, des maladies inflammatoires chroniques et des dérégulations immunitaires. CD14 est également utilisé comme marqueur et modulateur fonctionnel dans les analyses de la différenciation monocyte-macrophage, de la polarisation et des réponses au microenvironnement.

CD14 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CD14 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD14 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CD14 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CD14, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD14. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CD14 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD14 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD14 dans les cellules tumorales présentant une expression de CD14 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.